Prisys Biotechnology では、オリゴヌクレオチドベースの医薬品、特に低分子干渉 RNA (siRNA) 治療薬に対する関心が高まっていることを認識しています。{0} siRNA は、小分子薬や抗体ベースの治療に続く第 3 世代の治療薬であり、医薬品開発分野に革命をもたらす大きな可能性を示しています。-
siRNA の作用機序:
siRNA は約 20 塩基の短いヌクレオチド配列であり、ワトソン クリックの塩基対形成原理を利用して相補的な mRNA 鎖に結合し、それによって転写および翻訳のプロセスに影響を与えます。 siRNA は、その構造および機構の違いに基づいて、アンチセンス オリゴヌクレオチド (ASO)、低分子干渉 RNA (siRNA)、低分子活性化 RNA (saRNA)、マイクロ RNA (miRNA)、およびアプタマーに分類されます。中でもsiRNAは、有望な治療効果と技術の進歩により大きな注目を集めています。
化学修飾と送達システムの重要性:
未修飾の siRNA は半減期が短く、-オフターゲット毒性のリスクがあります。-化学修飾と適切な送達システムは、治療効果を達成する上で重要な役割を果たします。前述の 6 つの承認済み siRNA 医薬品は、ホスホロチオエート骨格修飾や、2'-O-メチル (2-OMe)、2'-O-メトキシエチル (2-MOE)、2'-フルオロ (2-F) などのリボース修飾などの化学修飾を受けています。さらに、siRNA 送達の効率は、LNP や GalNAc コンジュゲートなどの高度な送達システムに依存しており、どちらも肝臓を標的とする機能が実証されています。
前臨床安全性評価と動物種の選択:
siRNA 医薬品の前臨床安全性評価には、動物モデルにおける標的特異的毒性とオフターゲット毒性の評価が含まれます。{0}{1}げっ歯類や非ヒト霊長類（NHP）などの動物種の選択は、siRNA 薬の特有の特性によって異なります。たとえば、霊長類の種は標的 mRNA 配列に関してヒトと高い相同性を示し、siRNA の薬物動態および薬力学をより適切に評価できます。安全性評価にヒト以外の霊長類を利用することは、特に肝臓を標的とする siRNA 薬の場合、一般的に行われてきました。
肝臓毒性と免疫反応:
肝臓は、siRNA 治療において重要な関心のある臓器です。承認された siRNA 薬は、肝臓への特異的な送達、肝細胞への取り込み、および潜在的な肝毒性に関連するさまざまな特徴を実証しています。{1}組織病理学的研究により、肝細胞の空胞化、炎症性浸潤、およびアラニントランスアミナーゼ（ALT）やアスパラギン酸トランスアミナーゼ（AST）などの肝酵素の軽度の上昇が明らかになりました。抗薬物抗体（ADA）、サイトカイン放出、補体活性化、免疫表現型検査などの免疫応答も評価およびモニタリングされています。
siRNA- を介した遺伝子サイレンシングは、計り知れない治療の可能性をもたらします。ただし、正確な消音を実現するのは困難な場合があります。 siRNA が意図しない遺伝子を誤って抑制するオフターゲット効果は、予期せぬ結果を引き起こす可能性があります。-日本医薬品医療機器総合機構 (PMDA) は、「オリゴヌクレオチド治療製品の非臨床安全性評価に関するガイドライン」でこのことを認識しており、siRNA の毒性を標的型とオフターゲット型に分類しています。{6}
肝臓：最大の標的、最大の関心事
肝臓は、siRNA 薬にとって主に懸念される臓器です。さらに詳しく調べるために、薬剤の特性、薬物動態、観察された病理に焦点を当てて、市販されている 6 種類の siRNA 薬剤を分析します。注目すべきことに、6 つすべてが合成または発現のいずれかの肝臓関連遺伝子を標的としています。-さらに、それらはチオリン酸のように化学的に修飾されており、タンパク質との高い結合により肝毒性を引き起こす可能性があります。脂質ナノ粒子 (LNP) と N- アセチルガラクトサミン (GalNAc) の結合は両方とも、肝臓の標的化を促進します。たとえば、LNP siRNA 薬である Patisiran の LNP の 80{8}90% は、静脈内投与により肝臓に蓄積します。- GalNAc- siRNA は、ASGPR を介したエンドサイトーシスを利用して細胞内に取り込み、ASGPR は肝細胞で高度に発現します。
肝臓毒性プロファイル: 蓄積から炎症まで
組織分布分析により、肝臓内の siRNA 濃度が最も高いことが一貫して明らかになります。たとえば、ルマシランは、10 mg/kg でサルにおいて 76,700 h*ug/mL の AUC と 409 時間の半減期を示しました。-特に、長期のサル毒性研究では、用量依存的な肝臓の組織病理学的変化が明らかになりました。-
1. 肝細胞/クッパー細胞の好塩基性顆粒: これらは、薬物、その代謝産物、またはオリゴヌクレオチドに対する細胞の適応を表す可能性があります。
2. 肝細胞の空胞化：細胞質の好塩基性顆粒の蓄積による二次的な影響の可能性があります。
3. 炎症性浸潤: 薬物濃度が高いと、炎症促進経路が活性化される可能性があります。-
4. 肝細胞単細胞壊死-: 高用量で重度の病理学的損傷が発生し、好塩基性顆粒が広範囲に蓄積します。
これらの変化には、ALT や AST などの血液生化学マーカーの上昇が伴うことがよくあります。ただし、組織損傷、関連する指数変化、可逆性、および他の siRNA 医薬品における同様の所見を包括的に評価することは、これらの変化の真の有害性を判断するために重要です。
肝臓を超えた領域: 標的外の毒性と免疫刺激-
配列の相補性{0}}独立したオフターゲット毒性-にも注意が必要です。免疫刺激反応はヌクレオチド配列設計と化学修飾に大きく依存しており、その結果の 1 つです。 siRNA 薬は自然免疫系を活性化し、注射部位反応 (Patisiran、Inclisiran) や血小板 (PLT) の減少 (Patisiran、Givosiran) を引き起こす可能性があります。免疫刺激の評価には、関連マーカーの in vivo 分析と、サイトカイン放出を予測するための単離された末梢血単核球または全血を使用した in vitro 評価が含まれます。
凝固機能の変化など、-ハイブリダイゼーション-に関連しない-オフターゲット効果も発生する可能性があります。特定の siRNA 薬剤は、凝固カスケードの第 IXa 因子および第 VIIIa 因子を選択的に阻害し、トロンビンの作用時間を変化させ、凝固を間接的に阻害します（例、Patisiran、Lumasiran、わずかに上昇した APTT）。さらに、siRNA 薬は阻害剤 H に結合し、補体バイパス経路を活性化することができます。補体の過剰活性化はその機能を破壊し、二次的な炎症や血管炎を引き起こす可能性があります（例、パティシランによる C3a 増加、肝臓の炎症性浸潤、注入部位の血管周囲の炎症）。
配送システムの毒性: キャリアを見落とさないでください
多くの場合 LNP である配送システムも注目に値します。新しい賦形剤または LNP の成分比の変更には、徹底的な調査が必要です。特定の LNP ガイドラインはまだ存在していませんが、「業界向けのガイドライン: リピオドール製品の化学、製造、および管理、ヒトの薬物動態とバイオアベイラビリティ、およびラベル表示に関する文書」などの既存のガイドラインは、貴重な洞察を提供する可能性があります。 patisiran の LNP 調査も参考になります。特に、LNP が非独立の賦形剤登録基準に該当する場合、siRNA の 2 種の要件を考慮して、siRNA の非臨床安全性評価と同じ動物種を使用して siRNA と並行して調査できます。-
結論：
siRNA 治療薬の分野は、送達システムの改善、化学修飾、オフターゲット効果の最小限化、適応症の拡大に重点を置いて進歩し続けています。{0} Prisys Biotechnology は、創薬および送達システムの専門知識を活用して、革新的な siRNA- ベースの治療法の開発に引き続き取り組んでいます。私たちは、満たされていない医療ニーズに対処し、患者の転帰を改善する革新的な治療法を生み出すよう努めています。
